2.2 Daño Del Adn


2.2         Daño Del Adn:

Puede determinarse por diferentes técnicas como son: la formación de micronúcleos inducida por la radiación, el comet assay o electroforesis unicelular o la medida del daño inicial de ADN radioinducido, estimado midiendo roturas dobles de cadena con electroforesis de campo pulsado. Mediante suspensiones de fibroblastos o queratinocitos, se procede a irradiación a diferentes dosis. Posteriormente, se procesan las muestras para realizar una electroforesis de campo pulsado (PFGE), que permite movilizar fragmentos grandes de ADN, como son los producidos tras una rotura doble de la cadena del ADN.

En un intento de acortar la duración del ensayo predictivo, se ha analizado el daño inicial del ADN radioinducido, mediante la estimación del número de roturas dobles de cadena por electroforesis de campo pulsado (PFGE) en células epidérmicas o fibroblastos con resultados positivos, tras comprobar que dicha técnica se correlaciona con los resultados obtenidos en ensayos clonogénicos, o electroforesis de campo constante con un resultado adverso. Asimismo, otros grupos han analizado el daño del ADN, utilizando la formación de micronúcleos radioinducida o el comet assay, con resultados contradictorios, no concluyentes

Autor

Pacientes

Tipo de ensayo

Toxicidad

Loeffler1990

5 Ca mama hipersensib 6 Ca mama normales

Cultivos celulares: D0, D10, n

SI

Geara 1993

25 CyC, 2 Ca mama

Cultivos celulares: SF2

SI

Burnet 1994

6 Ca mama hipersensib

Cultivos celulares: SF2, D10

SI

Brock 1995

22 Ca mama

Cultivos celulares: SF2

SI

Dahlberg 1995

2 AT homo

3 AT hetero

4 hipersensibles

5 controles normales

Cultivos celulares: SF2

SI, diferente SF2 entre controles y

pacientes

hipersensib o AT

hetero/homo

Johansen1996

31 Ca mama

Cultivos celulares: SF2, SF3.5

SI

Tucker 1996

17 CyC prospectivos

6 Ca mama y 3 CyC

retrospectivos

Cultivos celulares: SF2

SI

Burnet 1996

4 controles 3 pacientes hipersensib

Cultivos celulares

SI, utilizando LDR

Alsbeih 1999

3 pacientes controles 4 pacientes hipersensib

Cultivos celulares: SF2

SI

Alsbeih 2000

5 pacientes controles 5 pacientes hipersensib

Cultivos celulares: SF2

SI

Rudat1997

33 CyC y Ca pulmón 22 controles

Cultivos celulares: SF2

NO

Russell 1998

79 Ca mama

Cultivos celulares: SF2, SF4

NO

Rudat 1999

25 CyC

Cultivos celulares: SF2

NO

Peacock 2000

39 Ca mama hipersensib 65 Controles

Cultivos celulares: SF2

NO

Borgmann 2002

16 CyC con distinta toxicidad tras RT

Cultivos celulares: SF2

NO

Oppitz 2001

88 ptes tratados con RT

Cultivos celulares: SF2

Efectos agudos:

SI E. tardíos: NO

Tabla 2. Estudios con fibroblastos, analizando cultivos celulares y SF2.

Autor

№ pacientes

Tipo de ensayo

Correlación con toxicidad

Nachtrab1998

10 pacientes controles,

10 hipersensib y 2 AT

homo

Formación micronúcleos

SI

Johansen 1998

36 Ca mama

Formación micronúcleos

NO

O’Driscoll 1998

9 Ca cervix 1 AT homo

Formación micronúcleos

NO

Nuñez 1998

Ca mama

PFGE: roturas dobles cadena

SI

Oppitz1999

30 pacientes 4 AT homo

Comet assay

SI

Kiltie 1999

39 Ca mama

PFGE: roturas dobles cadena

SI

Slonina 2000

31 pacientes 5 controles sanos

Formación micronúcleos

NO

Dikomey2000

12 Ca mama NER

CFGE: roturas dobles cadena

NO

Borgmann 2002

16 CyC con distinta toxicidad tras RT

Inducción y reparación

dbs: constant-field gel

electrophoresis

NO

Tabla 3. Estudios con fibroblastos o queratinocitos analizando daño del ADN.